誘導(dǎo)表達(dá)原理:
將外源基因克隆在含有Lac啟動(dòng)子的表達(dá)載體中,讓其在大腸桿菌中表達(dá)。先讓宿主菌生長(zhǎng),LacI產(chǎn)生的阻遏蛋白與Lac操縱基因結(jié)合,從而不能進(jìn)行外源基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá),此時(shí)宿主菌正常生長(zhǎng)。然后向培養(yǎng)基中加入Lac操縱子的誘導(dǎo)物IPTG,阻遏蛋白不能與操縱基因結(jié)合,則外源基因大量轉(zhuǎn)錄并高效表達(dá)。
①Z、Y、A是指結(jié)構(gòu)基因,用于表達(dá)性狀;
lacZ編碼β-半乳糖苷酶,它可以切斷乳糖的半乳糖苷鍵,而產(chǎn)生半乳糖和葡萄糖;
lacY編碼β-半乳糖苷透性酶,它構(gòu)成轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng),將半乳糖苷運(yùn)入到細(xì)胞中;
lacA編碼β-半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶,只將乙酰-輔酶A上的乙?;D(zhuǎn)移到β-半乳糖苷上;
②I是指調(diào)節(jié)基因,調(diào)節(jié)分泌阻遏物或誘導(dǎo)物;
③O是指操縱基因,與阻遏蛋白的結(jié)合部位;
④P是指啟動(dòng)子,啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯。
乳糖操縱子是參與乳糖分解的一個(gè)基因群,由乳糖系統(tǒng)的阻遏物和操縱序列組成,使得一組與乳糖代謝相關(guān)的基因受到同步的調(diào)控。1961年雅各布(F.Jacob)和莫諾德(J.Monod)根據(jù)對(duì)該系統(tǒng)的研究而提出了著名的操縱子學(xué)說(shuō)。在大腸桿菌的乳糖系統(tǒng)操縱子中,β-半乳糖苷酶,半乳糖苷滲透酶,半乳糖苷轉(zhuǎn)酰酶的結(jié)構(gòu)基因以LacZ(z), Lac Y(y),Lac A(a)的順序分別排列在質(zhì)粒上,在z的上游有操縱序列Lac O(o),更前面有啟動(dòng)子Lac P(p),這就是操縱子(乳糖操縱子)的結(jié)構(gòu)模式。編碼乳糖操縱系統(tǒng)中阻遏物的調(diào)節(jié)基因Lac I(i)位于和p上游的鄰近位置。
當(dāng)使用自誘導(dǎo)培養(yǎng)基時(shí),傳統(tǒng)這種使用IPTG,檢測(cè)OD600的過(guò)程都可以省略。靶點(diǎn)科技現(xiàn)貨自誘導(dǎo)培養(yǎng)基,此外,產(chǎn)量更高。但是對(duì)于包涵體的問(wèn)題,需要優(yōu)化。
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