氯膦酸二鈉脂質體Clodronate Liposomes是相對于抗體，基因敲除小鼠等手段而言目前來說成熟（Nico Van Rooijen教授90年代開發(fā)和后期荷蘭liposoma公司商業(yè)化生產），可靠，經濟且廣泛使用的一種有效的巨噬細胞清除工具。脂質體包裹氯膦酸鹽通常用于清除巨噬細胞群，因為它一旦被巨噬細胞吞噬，然后被溶酶體酶消化，游離氯膦酸鹽在細胞質內積累，當濃度超過一定閾值時就會產生功能上不可逆的抑制和細胞凋亡。由于氯膦酸鹽在血液中的半衰期只有幾分鐘，游離的氯膦酸鹽會被腎臟迅速清除。借助腹腔，尾靜脈等多種給藥方式實現(xiàn)不同組織部位中巨噬細胞的清除。荷蘭liposoma是目前Cell，Nature和Science頂刊發(fā)表的用于體內/體外巨噬細胞清除的氯磷酸二鈉脂質體/氯膦酸鹽脂質體。
對于腦部巨噬細胞，可以參考我們之前的文章，有專門介紹腦各種類型巨噬細胞的。常駐小膠質細胞與血管周圍和腦膜巨噬細胞一起由胚胎卵黃囊前體產生，占所有腦細胞的10%。氯膦酸鹽脂質體通過腦內或腦室注射給藥，主要是掌握腦立體定位注射，可以定點清除海馬，下丘腦等部位巨噬細胞。北京腦科學與類腦研究所利用荷蘭liposoma的氯膦酸鹽脂質體Clodronate Liposomes清除下丘腦巨噬細胞的文獻可以聯(lián)系我們索取。
腦巨噬細胞清除參考模型一
動物模型：C57BL/6J小鼠，使用海馬切片培養(yǎng)直接研究小膠質細胞
巨噬細胞清除方法：在體外試驗天數(shù)的第0天和第3天，在培養(yǎng)基中加入0.05 mg/mL Clophosome-A 培養(yǎng)24小時。對照組給予等量陰離子脂質體對照加入到培養(yǎng)基中。處理后，切片用加熱的PBS仔細沖洗三次，并用新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)。
巨噬細胞清除結果：
在氯膦酸處理的培養(yǎng)物中，小膠質細胞被顯著去除(圖A, 3)，而氯膦酸鈉對神經元密度無影響
腦巨噬細胞清除參考模型二
動物模型：C57BL/6J小鼠
巨噬細胞清除方法：立體定位注射10ul
巨噬細胞清除結果：
腦室內的氯膦酸鈉導致血管周圍CD206陽性巨噬細胞的清除，但不影響小膠質細胞(P2Y12R標記，綠色)。用內皮標記物番茄凝集素(藍色)觀察血管。
腦巨噬細胞清除參考模型三
動物模型：C57BL/6雄性小鼠(8 ~ 10周齡，23 ~ 25 g)；C57BL/6背景Cx3cr1GFP/+小鼠(雄性，8 ~ 10周齡，23-25 g)
巨噬細胞清除方法：
Cx3cr1GFP/+小鼠和C57BL/6小鼠，將1 μL的Liposomes 或1 μL的對照Dil-Lip注射到左紋狀體(距囟門前方0.8毫米，外側2.0毫米，深度為3.0毫米)
巨噬細胞清除結果：
A.
注射Clodronate liposomes于24小時開始在腦實質中消耗小膠質細胞，注射1 μL Dil-Lip后第1天的一系列腦切片（脂質體用紅色熒光染料Dil標記）進入紋狀體（圖A第一排）或腦側室（圖A第二排）
代表性圖像顯示，紋狀體注射 Dil-Lip或Clodronate liposomes后不同時間點Cx3cr1-GFP+小膠質細胞（綠色）的耗竭。（圖A第三、四排）顯示放大后的小膠質細胞圖像。
B.
注射1 μL Clodronate liposomes后紋狀體Cx3cr1-GFP+細胞的量化數(shù)據（圖B）。
C.
在Clodronate liposomes注射后的第1、4、7天，用流式細胞術分析Cx3cr1-GFP+小膠質細胞。圖中顯示了代表性的點圖，并顯示了紋狀體細胞群中Cx3cr1-GFP+的百分比。紅色：Cx3cr1-GFP?細胞群；綠色：Cx3cr1-GFP+細胞群（圖C）。
D.
圖表顯示注射Clodronate liposomes后紋狀體和皮層中剩余Cx3cr1-GFP+種群的百分比（圖D）。
腦巨噬細胞清除參考模型四
巨噬細胞清除方法：海馬切片培養(yǎng)中加入氯膦酸脂質體體外18天，濃度0.5 mg/mL（氯膦酸共500 µg），24小時后，用培養(yǎng)基輕輕洗滌培養(yǎng)物，并給予另一劑量的0.5 mg/mL氯膦酸脂質體，再孵育24小時，此時再次洗滌培養(yǎng)物，置于新培養(yǎng)基中，孵育7天。第7天，培養(yǎng)的小膠質細胞耗盡，準備進行后續(xù)實驗。
巨噬細胞清除結果：
小膠質細胞、星形膠質細胞、少突膠質細胞和神經元的代表性細胞特異性標記染色（Iba1，
GFAP, CNPase和NeuN）分別顯示與對照組（第一排）相比氯膦酸脂質體處理（第二排）的切片小膠質細胞耗竭，且對其他細胞類型沒有影響（比例尺，20毫米）。
